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人真皮成纤维细胞的分离培养制备方式

2019/10/3 15:38:31发布159次查看
 真皮成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。细胞来源于人正常的皮肤组织,真皮成纤维细胞是一种贴壁培养方式的细胞,由于这些细胞非常容易培养,它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。
      一般而言,成纤维细胞能够分泌i型和iii型胶原等细胞外基质,并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。伤口修复时,真皮成纤维细胞由可增殖,可迁移的表型变为有收缩性的,可重塑基质的表型,同时,它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。
      以下是赛百慷提供的一种人真皮成纤维细胞的制备方式(仅供参考):
      1.首先在分离真皮成纤维细胞时要做到在无菌条件下进行,打开生物安全柜紫外灯30min作无菌处理。
      2.将手术废弃的皮肤组织浸泡75%酒精,消毒2min,
      3.将皮肤组织置含p/s的pbs中清洗至少3遍,
      4.然后用眼科剪除去脂肪及结缔组织等,
      5.将皮肤剪成0.5*0.5 cm小块,放入dish中,加0.1%的dispase溶液,封口膜封口,4℃冰箱过夜消化,
      6.第二天,用镊子将表皮与真皮分开(薄的那层是表皮,厚的那层是真皮),
      7.将真皮剪碎,移至离心管,用0.1%胶原ⅰ型酶+0.1%胶原ⅱ型酶+0.1%胶原ⅳ型酶+ 37℃水浴锅中消化至少2 h(视消化程度而定),
      8.用100 μm网筛过滤,
      9.取滤液,300 g,离心5 min,
      10.用完全培养基重悬沉淀,
      11.铺瓶,
      12.隔天换液。
      以上是皮肤成纤维细胞分离培养的一种方式,不同的技术人员分离培养的方法也不同,使用的试剂比例也不尽相同,皮肤成纤维细胞特异性纤维连接蛋白或波形蛋白表达检测,采用细胞免疫荧光技术。细胞纯度可高达于90%,所有的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

赛百慷(上海)生物技术股份有限公司
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